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亚荣旋转蒸发器分离样品步骤有哪些呢?

返回列表 来源:未知 发布日期:2019-05-13 16:07【
1、上海亚荣介绍分离样品所需要的仪器与材料 :RE-52AA旋转蒸发仪 ( 上海亚荣生化仪器厂) ; 超高效液相色谱仪( 美国戴安公司) ; Bruker Daltonics MS( 德国鲁克公司) ; Bruker Avance Ⅲ -400 核磁共振仪( 德国布鲁克公司,TMS为内标) ;  电子天平-梅特勒-托利 ( 上海) 有限公司;柱色谱硅胶和薄层色谱硅胶板GF254( 青岛海洋化工厂) ; Sephadex LH - 20( 瑞典 Amersham Biosciences 公司) ;阿司匹林肠溶片( 沈阳 奥吉娜药业有限公司) ; 吡啶、冰乙酸( 上海国药集 团化学试剂责任有限公司) ; 环己烷、结晶乙酸钠、 二甲基亚砜[利安隆博华( 天津) 医药化学有限公 司] ; 氯化铁血红素、磷酸氯喹、HEPES( 美国 Sigma 公司) ;盐酸( 西陇化工股份有限公司) ;无菌生理盐 水( 天津市风船化学试剂科技有限公司] ; 石油醚、 乙酸乙酯、正丁醇、甲醇等试剂均为工业级溶剂,重蒸后使用。

2、上海亚荣介绍旋转蒸发器分离样品的实验步骤和方法:利用上海亚荣RE-52AA旋转蒸发器提取与分离匙萼金丝桃全株9.3kg,用体积分数95%乙醇冷浸提取9次,减压浓缩所得总浸膏( 1. 26kg) 以水分散依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到相应萃取物。乙酸乙酯萃取物( 322g) 经300~400目硅胶柱色谱,氯仿-丙酮洗脱系统( 1∶ 0→0∶ 1) 梯度洗脱,得到9个流分( A ~ I) 。B组分经反复硅胶柱色谱( 石油醚-丙酮1∶ 0 ~0∶ 1、石油醚-乙酸乙酯1∶ 0 至 0∶ 1、石油醚-乙酸乙酯10∶ 1、氯仿-丙酮10∶ 0) 及反复葡聚糖凝胶柱色谱( Sephadex LH- 20) ( 氯仿-甲醇1∶ 1、甲醇) 得到化合物1( 20mg) 、 3( 57mg) 和 5 ( 126. 8mg) 。C组分经硅胶柱色谱( 氯仿-丙酮 5∶ 1) 及反复葡聚糖凝胶柱色谱( Sephadex LH-20) ( 氯仿-甲醇1∶ 1、甲醇) 得到化合物 4( 15mg) 、 8( 25mg) 和9( 20mg) 。E组分经反复硅胶柱色谱( 氯仿甲醇1∶ 0 至 0∶ 1) 得到化合物 6( 17. 2mg) 和 7( 10mg) 。G组分经反复葡聚糖凝胶柱色谱( Sephadex LH -20) ( 氯仿-甲醇1∶ 1、甲醇) 得到化合物 2( 20. 8mg) 。H组分经反复硅胶柱色谱( 氯仿-丙酮 1∶ 0至0∶ 1、氯仿-甲醇1∶ 0至0∶ 1) 得到化合物11( 70mg)和13( 15mg) 。组分经反复硅胶柱色谱( 氯仿-甲 醇1∶ 0 至 0∶ 1) 纯化得到化合物10( 20 mg) 和 12 ( 1. 1 g) 。

3、生物活性评价:小鼠乙酸扭体实验小鼠雌、雄各半,随机分为对照组、样品组、阳性药组,每组6只。以一 定剂量灌胃给药,阴性对照组给予等量生理盐水,阳 性药组给予阿司匹林,给药40min 后,每只小鼠腹腔注射0. 6%冰乙酸溶液0. 2mL·10g -1,注射冰乙酸3 ~5min后观察并记录15min内小鼠的扭体 次数,按下列公式计算受试物对小鼠乙酸扭体的抑制率,以此来评价受试物的镇痛作用。 疼痛抑制率( %) =( 阴性对照组扭体次数一给药组扭体次数) /阴性对照组扭体次数 ×100% 。 分别取50μL不同浓度的供试品溶液于96孔板,加入50μL氯高铁血红素和80μL乙酸缓冲溶液,一式3 份。同时设置氯喹阳性对照和蒸馏水( 或二甲基亚 砜) 阴性对照。置于50 ℃培养箱中孵育5或12h; 取出置室温后,每孔加入100μL 吡啶-HEPES溶液使微孔板中固体混悬,室温放置一夜;从每孔内取出50μL上清液加 200μL吡啶-HEPES溶液稀释, 在405nm波长为处测定吸光度值,计算 IC50值。
。本实验丰富了匙萼金丝桃的化学成分与生物活性研究内容,揭示了匙萼金丝桃具有潜在的镇痛与抗疟研究应用价值,为该植物的深入研究提供了实验依据。以上内容仅供大家参考。