红花资源鉴定中,需要用到哪些实验室仪器呢,以前有客户就问到过这个问题,今天在文中介绍如下,一种利用高效液相色谱法⁃紫外法快速、简单并同时检测红花籽中油酸与亚油酸成分含量的方法,用以直接鉴定红花籽亚油酸和油酸含量高低,为红花资源鉴定提供理论依据。该方法具有分离效率高,操作简单,检测快速的优点。
1 、上海亚荣生化仪器厂介绍本次实验所需要的材料
试验材料:供试红花种子为中国农业科学院油料作物研究所提供,为新疆红花种子;
实验器材:岛津 UV⁃2600 紫外分光光度计;安捷 伦 1260 液 相 色 谱 仪 ;色谱柱;10mL烧杯;100mL圆底烧杯;50mL容量瓶(上海亚荣生化仪器厂生产);5mL容量瓶;样品瓶;注射器;研磨棒;超声清洗仪;移液枪;上海亚荣B-260恒温水浴锅;漩涡震荡仪;离心机;ME204E分析天平(瑞士梅特勒⁃托利多公司);纯水仪;高压灭菌锅等。
实验试剂:0. 5 mol/L 氢氧化钾(乙醇)溶液;1 mol/L 水⁃HCl;酚酞;无水乙醇;亚油酸对照品(CAS#60⁃33⁃3,LOT:23O8B46354),油酸对照品(CAS#112⁃80⁃1,LOT:S09A8B33442),购自上海源叶生物科技有限公司,GC≥98%;乙腈为色谱纯,Sigma公司;超纯水等。
2、上海亚荣生化仪器厂介绍本次试验方法
标准溶液的制备:称取油酸、亚油酸对照品适量,精密称定,置 20mL容量瓶中,用乙醇定容至20mL,制成含有油酸、亚油酸分别为0. 872、0. 441g/L的混合对照品溶液,备用。
样品准备与提取:取大小均一的 3粒种子为一份,称重,置于研钵中液氮研磨,转移至 1. 5mLEP管中,加入400µL超纯水溶解,加入2%果胶酶与纤维素酶各1µL,30℃酶解3h,100℃灭活5min,12000r/min 离心10min,移取上层清油和少许乳化层,将清油再次12000r/min离心10min,移取上层清油。精密吸取提取液100uL,至 5mL容量瓶中,加甲醇溶解定容,0. 45µm微孔滤膜过滤,取续滤液进行测定。取大小均一的 3粒成熟种子为一份,称重,置于10mL烧杯中,用研磨棒磨碎,转移到 上海亚荣生化仪器厂生产的100 mL 圆底烧瓶内,加入28. 055 g/L氢氧化钾乙醇溶液清洗10mL烧杯,清洗液一并转移到100mL圆底烧瓶中,定容到10mL,称重,超声5min,用 28. 055g/L氢氧化钾乙醇溶液补重,置于上海亚荣B-260水浴锅中 90 ℃加热回流提取30min,冷却至室温时称重并用28. 055 g/L氢氧化钾乙醇溶液补重,再加入50µL 酚酞试液,用 1 mol/L的盐酸溶液滴定至溶液刚变黄,将溶液转移至 50mL 量瓶中,用乙醇洗涤圆底烧瓶,洗涤液并入量瓶中,加乙醇定容至 50 mL,精密量取1mL到 5mL量瓶中,加乙醇定容至刻度,0. 45µm微孔滤膜过滤,按照色谱条件进行检测。
以上为简单的实验方法,仅供大家参考。