文中关键词:枇杷叶;科罗索酸;反相硅胶;上海亚荣RE-52A旋转蒸发器；葡聚糖凝胶;高效液相色谱法法
1、仪器与试剂
仪器：SHB-Ⅲ循环水多用真空泵、RE-52A旋转蒸发器、上海亚荣B-220恒温水浴锅、低速台式大容量离心机、电热恒温干燥箱、紫外分光光度计、日本岛津液相色谱仪。
试剂：甲醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯均为分析纯，工业乙醇，薄层层析硅胶G( 青岛胜海精细硅胶化工有限公司) 、D101吸附树脂 ( 青岛海洋化工厂) 、反相硅胶( 国药集团化学试剂有限公司) 、葡聚糖凝胶( 北京瑞达恒辉科技发展有限公司) 、科罗索酸标准品( 宝鸡晨光生物科技有限公司) 。
2、方法
2.1、 枇杷叶科罗索酸的提取：枇杷叶于5月份采自商洛市，经商洛学院李筱玲药师鉴定为蔷薇科植物枇杷的叶。洗净烘干后粉碎，称取1kg枇杷叶粗粉置于提取罐中，加入80%乙醇，料液比为1:8，100℃回流提取2h，提取液过滤药液收集，残渣置于提取罐中，加入80%乙醇二次回流提取，料液比1：6，100℃回流提取2h，提取液过滤，残渣弃去药液与一次提取药液合并收集，合并后药液置于上海亚荣RE-52A旋转蒸发器中减压浓缩至浸膏，冷冻于-20℃冰箱备用。
2.2、大孔吸附树脂初步分离科罗索酸：薄层色谱条件选择 取科罗索酸标准品少许用甲醇溶解，硅胶G铺板，0.5mm毛细管点板，展开系统选择氯仿-甲醇系统和乙酸乙酯 －甲醇系统，按不同比例依次展开，显色剂为重铬酸钾 － 硫酸，5g重铬酸钾溶于100mL，经显色剂显色后最终选择氯仿-甲醇( 13：1) ，乙酸乙酯-甲醇( 35：1) 。 大孔吸附树脂预处理及分离操作步骤取部分枇杷叶提取物浸膏60℃水浴解冻，解冻后溶解于60%乙醇中，充分溶解后使用离心机离心，离心机转速为5000r·min-1时间15min，沉淀收集放置于4℃冰箱保存备用，上清液 D101-大孔吸附树脂大孔吸附树脂分离。上样完毕后开始使用60%乙醇洗脱，前500mL液体弃去，然后开始收集液体 ( 每瓶500mL) 。再分别用70%，80%。90% 乙醇溶解沉淀上样并用相应浓度乙醇洗脱。洗脱液按顺序编号、点样、薄层展开、喷显色剂显色，将Ｒf值相同的斑点洗脱液合并。各组分分别用旋转蒸发仪浓缩至小体积，4℃保存。反相硅胶柱纯化科罗索酸粗品用水 － 甲醇梯度冲洗，依次用10%、20%、30%、40%、50%、60%、70% 、80%、85%、100%甲醇洗脱。将收集到的液体点板，相同的合并。用 70%甲醇洗脱，流速1.0m.min-1。按顺序编号点板、薄层展开，Ｒf值相同的斑点洗脱液合并，收集至瓶皿充氮气使其干燥。产品紫外全波长扫描对纯化所得产品进行紫外全波长扫描定性分析，得到其最大吸收波长。取少量纯化产品使用100%甲醇溶解至3mL，100%甲醇作为空白对照，使用紫外分光光度计进行紫外全波长扫描，波长范围为200 -700nm，扫描速度为20nm·min-1。
高效液相色谱法测定纯化后产品中科罗索酸纯度，有机系微孔滤膜过滤溶液。该制备方法简单易行，具有推广性，进一步改良条件后可用于制备液相。若需要高纯度的科罗索酸，该方法尚需进一步改良。以上内容仅供大家参考。
