文中,主要介绍了上海亚荣生化仪器厂生产的生化仪器在复合多糖实验中的应用以及简单的实验方法,仅供参考,如果您有旋转蒸发器相关的问题,欢迎您前来咨询,我们将及时为您解答。
上海亚荣介绍MTT法检测各组光老化皮肤细胞的存活率:人皮肤成纤维细胞、人永生化角质形成细胞融合度达70%-80%时,加入胰蛋白酶消化后用含体积分数为15%胎牛血清的DMEM培养液制成细胞浓度为1×108L-1的细胞悬液,以每孔100µL细胞悬液即每孔1×104个细胞接种于96孔板中,将培养板移入孵育箱,在体积分数为5%CO2,37℃条件下培养,24h后吸除细胞培养液,根据预实验的“浓度-效果”关系曲线,分别给予含50mg/L单一多糖、体积分数为15%优质胎牛血清和1%双抗的DMEM培养基继续培养,24h后吸除细胞培养液,PBS洗3遍,每孔加入100µLPBS,放置在距离紫外灯(波长254nm) 30cm下,设定15s的紫外辐照时长,辐照结束后吸除PBS,每孔重新加入全新培养液,继续培养,24h后每孔加入MTT溶液(5 g/L) 20µL,37℃(可用上海亚荣生化仪器厂生产的低温冷却液循环泵来控制温度)继续培养4h,终止培养,小心吸弃孔内培养上清液,每孔加150µL二甲基亚砜,振荡10min,使结晶充分溶解。在紫外灯下照射、未进行单一多糖干预的细胞为模型组,未在紫外灯下照射、未进行单一多糖干预的细胞为空白组。用全功能酶标仪在波长490nm处测定各多糖干预组的吸光度值(A值),以示细胞增殖情况。按照下列公式计算细胞存活率(%)=干预组的吸光度值/空白组的吸光度值×100%。
各单一多糖对光老化皮肤细胞超氧化物歧化酶、丙二醛和羟脯氨酸水平的影响:上述50mg/L单一多糖干预皮肤细胞24h后,吸除细胞培养基,PBS洗3遍,每孔加入100µLPBS,放置在距离紫外灯(波长254nm)30cm下,设定15s的紫外辐照时长,辐照结束后吸除PBS,每孔重新加入全新培养液,继续培养,24h后收集每孔的培养基上清液于离心管中,离心,取上清液于-20℃(可用上海亚荣生化仪器厂生产的低温冷却液循环泵来控制温度)保存用以生化指标检测。按照试剂盒说明书,检测细胞培养基上清液中超氧化物歧化酶、丙二醛和羟脯氨酸水平。
复合多糖对光老化皮肤细胞存活率、超氧化物歧化酶、丙二醛和羟脯氨酸水平的影响:为了进一步考察不同多糖混合后抗皮肤光老化的作用,实验增设了不同复合多糖配伍组,因此,该实验采用紫外灯照射角质形成细胞(HaCaT细胞)和真皮成纤维细胞(HSF细胞),诱导皮肤细胞光老化模型。这2种细胞模型是考察护肤产品抗皮肤衰老最常用的体外模型。在相同的造模条件下,人永生化角质形成细胞的存活率明显低于人皮肤成纤维细胞,提示人永生化角质形成细胞对紫外线可能更为敏感。
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