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旋转蒸发器在基因组去除反应实验中的运用

返回列表 来源:未知 发布日期:2019-09-17 13:46【
1、反转录过程
基因组去除反应:将置于冰浴中的离心管内分别加入试剂,轻轻混匀后,旋涡离心5s,混合物在亚荣旋转蒸发器中设定65℃水浴5min,再于- 4℃冰浴2min,然后再离心5s。
总RNA的逆转录反应:将试管冰浴,再按顺序加入的试剂,混匀后旋涡离心 5s。
PCR反应:在PCR仪上进行反转录反应 ,首先于25℃孵育10min;接着于50℃反应30min,使cDNA合成;最后于85℃反应5min,反应终止。反应完成后置于冰上放置,于-20℃贮存。
穿心莲关键酶基因的荧光定量PC检测:实验方法及引物采用real-timePCR法,以引物序列检测cDNA样本中基因ApCPS相对含量。PCR反应步骤 :按表配制反应体系的混合液,反应液的总体积量为20μl。反应过程为: 首先95℃处理3min进行预变性; 接着95℃变性时间为7s,57℃退火10s,72℃延伸15s,共计45个循环周期; 最后绘制溶解曲线。数据处理:采用计算穿心莲关键酶ApCPS基因的相对表达量。利用SPSS20.0软件进行数据统计,P<0.05表示具有统计学差异。
2、结果与分析
穿心莲两种倍性穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的变化 采用高效液相法对两种倍性的穿心莲植株含量进行测定,结果可以看出,不同倍性的穿心莲植株中的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量有明显的差异,从而为四倍体的穿心莲植株的质量评价标准提供参考。通过两种倍性的穿心莲植株的色谱图对比,可以看出四倍体穿心莲植株中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯与对照的出峰时间基本一致,峰型良好,并且2015版《中国药典》一部规定“按干燥品计算,含穿心莲内酯( C20 H30 O5 ) 和脱水穿心莲内酯( C20H28O4 ) 的总量不得少于0.80% 。”完全达到国家标准。由表计算可知,在四倍体组的穿心莲植株中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量分别为4.16%和0.16%,明显高于对照组中的2.12% 、0.09% 。即对于四倍体组来说,其总量为4.32% ,达到对照组总量2.21%的1.95倍,可见四倍体的穿心莲植株中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量明显高,为相关的研究提供了实验依据,也为研究四倍体的穿心莲植株的生理机制提供了参考价值。
以上内容仅供参考,目的就是让大家知道上海亚荣生化仪器厂的旋转蒸发器可运用在各个领域中。