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上海亚荣仪器在木材真菌分离纯化中的应用

返回列表 来源:未知 发布日期:2019-08-13 10:29【
文中结合形态学观察鉴别出造成木材腐朽的菌种。首先上海亚荣生化仪器厂在文中介绍本厂的研究所需要用到的仪器,之后简单介绍实验方法,供参考。
1、材料与实验方法
实验菌株:本实验的菌株子实体从大兴安岭自然保护区柳树的活立木材上采集。用酒精棉将刀具擦拭后进行切割,将采集来的菌株放在无菌袋内保存。
培养基:本实验主要采用PDA培养基: 将马铃薯取200g去皮处理切片状,煮置的沸液用纱布进行过滤处理,向其中加入20g葡萄糖,20g琼脂粉,用蒸馏水,蒸馏水是采用上海亚荣SZ-93A纯水蒸馏水器制备,定容至1000ml,pH为7.0,121℃灭菌20min。
实验仪器:实验仪器为仪上海亚荣SZ-93A自动纯水蒸馏水器、台式离心机、精密天平、紫外分光光度计、漩涡震荡器、小型高速离心机、组合式摇床、高压蒸汽灭菌锅及PCR仪等。
实验试剂:实验试剂为山梨醇、SDS、CTAB、醋酸钾、氯仿、蜗牛酶、蛋白酶K、EDTA琼脂糖和TaqDNA聚合酶,这些购自上海绿叶生物科技有限公司。
2、实验方法
筛选方法:本实验将采集的子实体进行处理,置消毒溶液中处理2-5min。用无菌蒸馏水多次洗涤,用无菌的镊子将组织块取少许转接到PDA培养基上, 25℃进行培养,当菌体生长出来后进一步分离,置-80℃冰箱保藏。
培养方法:从-80℃的冰箱里取出保藏的菌株进行活化处理,首先将其接种到马铃薯固体培养基上,进行活化,培养7d,再将培养完的菌株转接到PDA平板上。记录每组菌落生长情况,每组实验设置3个平行实验。
木材腐朽真菌的分离纯化,可用旋转蒸发仪进行分离纯化:将培养好的真菌置入液体培养基中进行生长。选择长势比较明显的菌落进行实验,放入25℃的摇床中培养。7d后选择单菌落进行密集划线纯化培养,获得两株纯的木材腐朽真菌,将其进行冰箱4℃保藏。由于木材腐朽真菌能够分解纤维素酶,因此将分离获得的纯木材腐朽真菌转接至PDA-愈创木酚培养基中,25℃下培养一周,观察菌落生长情况、变色圈是否出现以及菌丝的颜色变化。
本实验采取不同方法对木材腐朽真菌的基因组进行提取,对提取获得的DNA利用紫外吸收光谱和琼脂糖凝胶电泳( AGE) 检测。上海亚荣生化仪器厂生产的自动纯水蒸馏水器制备的蒸馏水可用在以上实验中,欢迎大家咨询采购。