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药材多酚类成分含量检测所需生化仪器?

返回列表 来源:未知 发布日期:2019-07-01 15:40【
药材的多酚类成分的含量检测,需要用到哪些仪器呢?文中,上海亚荣生化仪器厂做以下详细介绍。先从药材的多酚类成分的含量检测所需仪器和试剂出发,在分析检测实验方法和结果,供大家参考。材的多酚类成分的含量检测运用的是HPLC法。

1、详细介绍材的多酚类成分的含量检测所需要的材料
1.1、上海亚荣生化仪器厂介绍本次实验所需要的生化仪器
1260Infinity Ⅱ高效液相色谱仪,配二极管阵列检测器、四元泵、自动进样器(美国 AgilentTechnologies 公司);KQ5200E型超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司);AUW220D 型 1/10 万电子天平(日本岛津公司);SY5000油浴锅(上海亚荣生化仪器厂);RHP-400A 型高速多功能粉碎机(浙江永康市荣浩工贸有限公司);GKC 型数显控温水浴锅(上海波络实验设备有限公司)。
1.2、本厂实验所需要的试剂
新绿原酸(批号:X-014-180410)、绿原酸(批号:L-007-171216)、隐绿原酸(批号:Y-06-180425)、咖啡酸(批号:K-003-171216)、芦丁(批号:L-001-171216)、异槲皮苷(批号:Y-076-170517)、对羟基肉桂酸(批号:D-032-171216)、异绿原酸 B(批号:Y-069-170516)、异绿原酸 A(批号:Y-068-170801)、异绿原酸 C(批号:Y-070-170515)对照品,上海乔羽生物科技有限公司,质量分数均>98%,可供含量测定使用。乙腈(色谱纯,德国默克股份有限公司);甲醇(色谱纯,天津市科密欧化学试剂有限公司);磷酸(分析纯,天津市福晨化学试剂厂);乙醇(分析纯,无锡市苏强化工有限公司)。
1.3、需要检测的药材
验用9批枸骨叶药材,于2018年实地采集,均采自安徽芜湖,经安徽中医药高等专科学校汪荣斌副教授鉴定为冬青科冬青属植物枸骨 I.cornuta的叶。标本均存放于皖南医学院药学院。

2、上海亚荣介绍本厂实验的方法与结果
2.1、色谱条件
YMC-ODS C 18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱;流动相:乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B),梯度洗脱(0~15 min,8% A;16~30 min,15%A;31~50 min,18% A);检测波长为 320 nm;柱温:40 ℃;流速:1.0 mL·min -1 ;进样量:10 μL。在此色谱条件下,枸骨叶中绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、对羟基肉桂酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸 A、异绿原酸 B、异绿原酸 C 分离度良好。
2.2 、供试品溶液的制备
精密称取枸骨叶粗粉约 2.0 g,分别置 250mL具塞锥形瓶中,加 50%甲醇125mL,称定质量,80℃超声提取 50min,放冷;再次称定质量,加 50%甲醇溶液补足减失质量,摇匀,滤过,取续滤液 50mL,置于SY5000旋转蒸发器中水浴蒸干,当然SY5000也可以用油浴,这款仪器是水油两用的仪器;用适量 50%甲醇转移至 10 mL 容量瓶中并定容至刻度,摇匀,过0.22 μm 微孔滤膜,即得供试品溶液。
2.3 、对照品溶液的制备
精密称取对照品绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、对羟基肉桂酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸 A 、异绿原酸 B 、异绿原酸 C 对照品适量,置于上海亚荣生化仪器厂生产的50mL容量瓶中,用 50%甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,制成浓度分别为 0.163 8、0.064、0.055 2、0.046 2、0.086 6、0.098 2、0.060 6、0.049 6、0.057 6、0.101 8 mg·mL -1 的混合对照品溶液,4 ℃下储存备用。
2.4、精密度试验
精密吸取混合对照品溶液 10 μL,连续进样 6 次,记录色谱峰面积,结果绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、对羟基肉桂酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸 A、异绿原酸 B、异绿原酸C 的峰面积 RSD 分别为 0.32%、0.31%、0.11%、0.35%、0.08%、0.21%、0.44%、0.60%、0.49%、0.22%,表明仪器精密度良好。
2.5、稳定性试验
称取枸骨叶粉末约 2.0 g,按照 2.2项方法制备供试品溶液,室温放置 0、2、4、8、12、24 h 后按照 2.1项色谱条件进样分析,结果绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、对羟基肉桂酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸 A、异绿原酸 B、异绿原酸 C 的峰面积 RSD 分别为 3.49%、1.16%、1.99%、2.18%、2.08%、2.27%、1.88%、2.53%、2.46%、2.23%,表明供试品溶液在24h内稳定。
2.6、重复性试验
称取同一批次样品,按2.2项方法制备6份供试品溶液,按2.1项色谱条件分别进样,测定绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、对羟基肉桂酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸 A、异绿原酸B、异绿原酸 C 对应峰面积,计算其平均质量分数,其 RSD分别为2.93% 、 2.07% 、 3.83% 、 3.65% 、1.27%、3.35%、3.91%、1.32%、2.17%、2.82%,表明该实验方法重复性良好。
该方法简单快速、准确性高、重复性好,可为有效控制枸骨叶药材的质量提供依据。以上内容仅供大家参考。