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旋转蒸发器如何提取药材多糖成分呢?

返回列表 来源:未知 发布日期:2019-07-02 17:18【
上海亚荣生化仪器厂在文中介绍旋转蒸发器如何提取药材多糖成分,先从材料与方法开始分析,然后介绍药材-枳椇子多糖的提取,看看具体需要哪些生化仪器,以及简单的实验方法。

1、药材-枳椇子多糖的提取需要用到的材料与方法
仪器 :UV-2600紫外可见分光光度计,日本岛津公司;Multiskan GO全波长酶标仪,美国 ThermoScientific公司;上海亚荣RE-52AA旋转蒸发仪,上海亚荣生化仪器厂生产;B-220电热恒温水浴锅,上海亚荣生化仪器厂;FW-1000AD型快速开盖高速万能粉碎机,天津鑫博得仪器有限公司;CPA2250型电子天平(读数精度 0.01 mg),德国赛多利斯公司;KQ-300DE型数控超声波清洗器,昆山市超声仪器有限公司。
材料与试剂:枳椇子药材由太极缘生物科技有限公司提供,经陕西中医药大学王薇教授鉴定为鼠李科枳椇属枳椇 Hovenia acerba Lindl的带有肉质果柄的果实。无水葡萄糖,天津市科密欧化学试剂有限公司;黄嘌呤氧化酶、黄嘌呤、别嘌呤醇,均购自成都西亚化工股份有限公司;DPPH、ABTS,均购自美国Sigma公司;K2S2O8 、 EDTA- 2Na、 KH2PO4 、K2HPO4和甲醇、乙醇等试剂,均为分析纯。

2、利用上海亚荣旋转蒸发器提取药材多糖的实验方法
2.1、枳椇子多糖的提取
脱脂:称取干燥的枳椇子药材,适当粉碎,加20倍量甲醇-二氯甲烷(1∶1)混合溶剂回流2.0h,静置冷却,离心,回收溶剂。重复2次,将脱脂枳椇子药粉放于通风橱中,挥干溶剂,备用。
热水浸提: 称取20g脱脂药粉置于上海亚荣生化仪器厂的1000mL圆底烧瓶中,加入一定量的纯净水,置于上海亚荣RE-52AA旋转蒸发器中在一定温度水浴中浸提,经过一定时间后,静置冷却,分取上层溶液,离心半径9.8cm,9000r·min -1离心10min,再取上清液,置于上海亚荣RE-52AA旋转蒸发器中减压浓缩至100mL。
Sevag法除蛋白:将经过旋转蒸发器浓缩后的浓缩液倒入锥形瓶中,加入三氯甲烷-正丁醇(5∶1)混合液24mL,在恒温水浴振荡器上剧烈振摇20min,离心半径9.8cm,9000 r·min -1离心10min,取上清液。重复操作5~7次,至离心后无蛋白质沉淀出现。
醇沉:加入适量体积的乙醇,使乙醇终浓度为80%,于 4 ℃冰箱中静置过夜,离心半径9.8cm,9000r·min -1离心,收取沉淀,冷冻干燥,即得多糖。
标准曲线的绘制:精密称取无水葡萄糖对照品100mg,置100mL容量瓶中,加纯净水溶解并定容至刻度线。精准吸取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL置于10mL容量瓶中,分别加入2.0mL纯净水;再分别加入1.0mL 5%苯酚和5.0mL浓硫酸,再加纯净水定容至刻度,静置10min,再置沸水浴中15min。同法制得空白对照。在 490nm 波长处测定吸光度 A,以对照品溶液质量浓度为横坐标x(mg·mL -1 ),吸光度为纵坐标Y,绘制标准曲线,得回归方程为Y= 5.945 2X+0.0014(R =0.999 2),表明多糖在 0.020~0.120mg·mL -1质量范围内与吸光度呈良好的线性关系。

3、 枳椇子多糖体外活性测试
 DPPH自由基清除能力测定:试验方法参照文献,简述如下:DPPH用无水乙醇溶解,配制成浓度为100μmol·L -1 的溶液,取100μL不同浓度的样品溶液于96孔板中,再向其中依次加入100μLDPPH 溶液,避光反应30min后,在517nm处测定吸光度(A S )。以样品溶液加入100μL 无水乙醇溶液为样品对照组(A bs ),以DPPH溶液中加入等量的无水乙醇溶液作为对照(A C ),以无水乙醇为空白对照(A bc );Vc为阳性对照,测定方法相同。
以上内容仅供大家参考,欢迎大家咨询购买上海亚荣RE-52AA旋转蒸发器。