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磺胺类药品分析所用到的仪器介绍

返回列表 来源:未知 发布日期:2019-09-15 17:00【
磺胺类药品分析考虑到磺胺类药物在紫外条件下的特征吸收,磺胺类和四环素类抗生素将直接用紫外检测器进行测定,介绍磺胺类药品分析所需要的仪器设备,之后简单介绍下实验方法,供参考。

1、仪器与试剂
高效液相色谱仪(1260,美国Agilent公司,二极管阵列检测器DAD,荧光检测器FLD,美国Agilent公司);Agilent ZORBAXSB-C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm);AUTO SPE-06C全自动固相萃取仪(睿科仪器有限公司);RE-2000A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);超声仪(昆山市超声仪器有限公司);冷冻干燥机(美国Thermo公司)。磺胺嘧啶(SDZ)、磺胺二甲基嘧啶(SMZ)、磺胺甲基异恶唑(SMX)、氧氟沙星(OFL)、恩诺沙星(ENR)、诺氟沙星(NOR)、四环素盐酸盐 (TCN)( 德 国 Dr.Ehrenstorfer GmbH 公司,纯度97.7 %~99.6 %);OasisHLB、OasisWAX固相萃取小柱(500mg/6mL,美国Waters公司);SAX 阴离子交换小柱(500mg/6mL,美国Agilent公司);色谱纯甲醇、乙腈(美国 Honeywell公司);乙二酸四乙胺二钠盐(Na2EDTA)、柠檬酸、柠檬酸钠、甲酸、磷酸(分析纯,北京化工厂);0.7μm玻璃纤维滤膜(GF/F,英国 Whatman公司);0.22μm针头式过滤器(水系,天津市津腾实验设备公司);1mL一次性无菌注射器(常州金龙医用塑料器材有限公司)。分别准确称取10.0mg标准品,用乙腈溶解并定容于10mL棕色容量瓶中,配制成1g/L的单标储备液,置于-20℃的冰箱中保存。取各单标储备液适量,用乙腈-0.1mol/L 磷酸溶液(V︰V=10︰90)稀释成所需浓度的混合标准溶液。

2、样品处理
水样采集后在24h内经0.7μm玻璃纤维滤膜过滤,密封于棕色玻璃瓶中。量取1L已过滤水样倒入烧杯,加入0.5gNa2EDTA充分混匀后,使用5mol/L磷酸调pH值。利用全自动固相萃取设备,使用固相萃取柱进行净化和富集。萃取流程为:依次用10mL甲醇和10mL超纯水活化平衡;水样以8L/min的速度通过小柱;用10mL超纯水淋洗固相萃取柱;最后用10mL甲醇将目标抗生素洗脱下来。洗脱液放入上海亚荣梨形瓶进行旋转蒸发至近干,设置上海亚荣RE-2000A旋转蒸发器水浴温度设定为50℃。以乙腈-1%磷酸溶液(V︰V=10︰90)的混合物将洗脱液定容至1mL,用 0.22μm针头式过滤器过滤到进样瓶中。冻干沉积物样品经过60目筛进行分选,称取过筛 后的样品2.0g,分别加入10mL乙腈和柠檬酸缓冲液(pH=3.5),旋混1min,超声波提取15min,然后以3000rpm速度离心15min,将上清液转移到平底烧瓶中并于4℃避光保存,残留物重复提取3次,将上清液合并至上海亚荣平底烧瓶中。所提取的上清液置于上海亚荣生化仪器厂RE-2000A中50℃旋转蒸发至体积不变以去除有机溶剂后,加入0.5gNa2EDTA,并用超纯水定容至200mL,充分混匀,用5mol/L磷酸pH调节溶液pH值,过固相萃取系统。固相萃取的方法为:首先依次用10mL甲醇和10mL 超纯水对固相萃取柱进行活化平衡;然后提取液以5mL/min的速度通过小柱;取下净化柱,用10mL超纯水淋洗萃取柱,在负压下抽干10min;最后用12mL甲醇洗脱,洗脱液收集于50mL梨形烧瓶中。洗脱液置于上海亚荣RE-2000A中以50℃旋转蒸发近干,以乙腈-1%磷酸溶液(V︰V=10︰90)定容至1mL,经0.22μm针头式过滤器过滤于进样瓶中待测。

3、色谱条件
结合265nm至350nm范围内四环素的紫外吸收光谱扫描结果,同时考虑到磺胺类药物在紫外条件下的特征吸收,磺胺类和四环素类抗生素将直接用紫外检测器进行测定,采用268nm的检测波长;喹诺酮类抗生素能够产生荧光,可以采用荧光检测器进行定量分析,将检测器的激发波长设置为278nm,发射波长设置为445nm。进样量为10μL。考虑到磺胺类药品的分离效果,同时需要考虑喹诺酮类抗生素结构中游离羧基及碱性氮原子的解离造成色谱峰拖尾严重和保留值不稳定等问题,采用向流动相中添加磷酸作为离子抑制剂。
以上内容仅供大家参考,欢迎大家咨询购买旋转蒸发器。