大家都知道,龙眼好吃,汁多还甜,是大家都比较爱吃的水果,但是吃多不宜,因为龙眼是热性水果,吃多可能会上火。文中,针对龙眼核,对其活性脂质的分析。上海亚荣生化仪器厂先介绍水果核活性脂质分析实验所需要的仪器设备介绍,在简单介绍实验方法。
1、试验材料
原料与试剂:龙眼核,原产地广西玉林,购于汇丰药材商行;豆甾醇( 纯度>95% ) ,购自上海源叶生物科技有限公司; C16神经酰胺( C16-CER) 、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼( DPPH) ,购自Sigma公司; N-油酰基-植物鞘氨醇( 商品级CER-3) ,购自上海言臻贸易有限公司; HSF、HaCaT细胞,购自北纳创联生物科技有限公司; DMEM高糖培养基、pH7.4磷酸盐缓冲( PBS) 溶液、0.25%胰酶、青霉素 - 链霉素双抗、购自Thermo-Fisher公司; 胎牛血清,购自Gibco公司; CCK-8试剂盒( 500T) ,购自碧云天生物技术研究所; 其他试剂均为分析纯。
2、仪器与设备
上海RE-52AA旋转蒸发器,昆山舒美KQ-100E型超声波清洗 器,TU-190紫外-可见光分光光度计,NICOLEY -6700型全反射傅里叶红外光谱仪,Ultimate 3000RS型超高效液相层析仪,Wonda CractODS-2分析柱,冷冻干燥机,Forma3111二氧化碳培养箱,Synergy H4多功能酶标仪。
3、试验方法
用昆山舒美超声波清洗器KQ-100E超声提取龙眼核脂质粗提物:准确称取龙眼核粉120g于2000m锥形瓶中,以 95%乙醇为提取溶剂,在料液比1:15、提取温度:60℃下超声辅助提取40min。反应结束后,抽滤得滤液,用上海亚荣RE-52AA旋转蒸发仪旋蒸至恒重,冷冻干燥得龙眼核脂质粗提物( LNE) 。按式计算得率。得率 = 粗提物质量/龙眼核粉质量x100%分级萃取:准确称取10.0gLNE加入20mL水超声分散,置于分液漏斗中,依次用石油醚、正己烷、氯仿、正丁醇进行萃取,料液比为1:10,萃取3次,合并相同溶剂萃取相,减压浓缩后冷冻干燥得石油醚相( PEP) 、正己烷相( HEP) 、氯仿相( CEP) 、正丁醇相( BEP) 。
柱层析分离:采用湿法装柱,将已经用石油醚浸泡超声30min的100g硅胶( 200-300目) 装入层析柱( 26mm×500mm) 中,准确称取1gCEP干法上样后进行硅胶柱层析。洗脱剂梯度依次为体积比分别为9:1、7:3、5:5、3:7、1:9的石油醚-乙酸乙酯,分别洗脱200mL,顺序收集洗脱液,得到5个组分CEP-1~CEP-5。将各组分分别置于上海亚荣RE-52AA旋转蒸发器中减压浓缩,冷冻干燥后测定得率和总甾醇含量。
本文定性定量地检测龙眼核中的神经酰胺,为龙眼核作为制备神经酰胺的原料提供了研究方向,也为神经酰胺的分离鉴定提供了一种简单、安全有效的方法; 同时表明龙眼核活性脂质有望作为功效性成分添加于日用化学品中。以上内容仅供参考,欢迎大家咨询购买上海亚荣旋转蒸发器RE-52AA。