上海亚荣生化仪器厂在文中介绍了两种倍性穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的测定所需要用到的仪器设备，并简单介绍了实验方法，仅供大家参考。
1、仪器与试剂
高效液相色谱仪；上海亚荣RE-5205旋转蒸发器( 上海亚荣生化仪器厂) ；昆山舒美KQ-700DB超声波清洗器 ；分析天平( 十万分之一，德国sartorius公司)；植物总RNA抽提纯化的试剂盒；4SRed Plus核酸染色剂；琼脂糖。第一链cDNA合成试剂盒 。定量PCＲ试剂；甲醇为色谱纯；对照品：穿心莲内酯，纯度98.7%；脱水穿心莲内酯，纯度99.4% 。均购自中国食品药品检定研究院所。
2 、RE-5205方法
两种倍性穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的测定：色谱条件填充剂: 十八烷基硅烷键合硅胶; 流动相: 甲醇-水( 40：60) ；检测波长：穿心莲内酯检测波长为225nm，脱水穿心莲内酯检测波长为254nm；柱温：30℃；色谱柱：Waters C18 ( 0.6mm×150mm5μm) ；灵敏度：AUFs；流速：1.0ml /min；进样量：5μl。
溶液的配制：按2015 版《中国药典》一部穿心莲的方法，分别配制对照品和供试品进行，选择以40%的甲醇为溶剂，静置和超声处理1.5h，测定。
线性关系考察：分别吸取所配置各浓度对照品溶液5μl，按上述色谱分析条件注入液相色谱仪，记录峰面积。以穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，按以下色谱条件测定，测得的峰面积和被测物的进样量( μg) ，用最小二乘法进行线性回归，得到各个成分的回归方程以及线性范围的标准曲线表。
精密度试验：取对照品溶液，连续进样6次，每次进样5μL，记录各色谱峰的峰面积。穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰面积的RSD分别为0.0937% 、0.6934%，表明仪器的精密度良好。
稳定性试验：取同一样品溶液，分别于配制后的0，2， 6，12，24，48h进样5μl，记录各色谱峰的峰面积。穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰面积的RSD分别为 0.5914% 、1.2281%，表明供试品溶液在常温下48h内稳定。
重复性试验：取同一穿心莲植物材料，按供试品溶液制备方法平行制备6份供试品溶液，测定各成分峰面积，计算其PSD。测得穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的RSD分别为1.3063% 、1.1069% ，表明该方法的重复性良好。
加样回收率试验：取同一穿心莲植物材料，精密称定，分别按供试品含量 － 对照品量大致1:1的比例加入一定量的对照品溶液，平行制备6份供试品溶液，测定各成分的峰面积，计算加样回收率及ＲSD，发现平均回收率为99.61% 、98.50% ，ＲSD为1.26% 、1.8% 。
样品的测定：分别取两种倍性的穿心莲材料，制备供试品溶液，分别进样5μl，依次测定其穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。实时荧光定量PCＲ测定。
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