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亚荣RE-2000A运用在鱼腥草多糖相关分析中

返回列表 来源:未知 发布日期:2019-09-28 11:40【
上海亚荣生化仪器厂生产的RE-2000A是元彩色屏幕的2L旋转蒸发器,转速温度等一表显示,配套有循环水式多用真空泵,和低温冷却液循环泵,文中介绍RE-2000A旋转蒸发器在鱼腥草多糖相关分析中的运用,并介绍本次实验需要用到的其它仪器和设备。

1、材料与方法
鱼腥草多糖(实验室自制);透析袋MD44型(截留分子量8000~14000Da);丙酮、无水乙醇、无水乙醚、浓硫酸、正丁醇、硫酸铵、氢氧化钠、硫酸钾、盐酸、三氯乙酸、1, 1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基、氯化钡、明胶等均为分析纯。

2、上海亚荣介绍本次实验的主要设备与仪器
101-2AB型电热鼓风干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司);RE-2000A型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);HJ-6D型多头数显恒温磁力搅拌器(常州澳华仪器有限公司);PD5-3型真空冷冻干燥机(美国金西盟国际集团中国分公司);TU-1901型双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。

3、RE-2000A旋转蒸发器分析鱼腥草多糖的试验方法
鱼腥草多糖的制备:鲜鱼腥草剪去须根经清洗、干燥、粉碎,过100目筛,备用。称取鱼腥草粉末,按液料比20:1(mL/g)加入蒸馏水,于旋转蒸发器中RE-2000A设置80℃水浴条件下浸提2h,提取液离心(4000r/min,15min),上清液减压浓缩至一定体积,加入5倍体积的95%乙醇,静置12h,离心,沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤,得鱼腥草粗多糖。鱼腥草粗多糖经Sevage法除蛋白,透析,真空冷冻干燥,得鱼腥草多糖。

鱼腥草多糖的硫酸酯化:采用浓硫酸法。分别量取浓硫酸7.5mL、正丁醇2.5mL置于装有冷凝管和搅拌装置的干燥三颈瓶中,加入硫酸铵0.125g,磁力搅拌,冰水冷却至0℃,缓慢加入鱼腥草多糖粉末0.5g,分别反应30,60,90,120和150min,反应液经预冷至0℃的1mol/L的NaOH溶液中和至pH7.0,离心,透析,冷冻干燥,得硫酸酯化鱼腥草多糖S-HCP1、S-HCP2、S-HCP3、S-HCP4、S-HCP5。

硫酸酯化鱼腥草多糖含量的测定:采用苯酚-硫酸法。精密量取葡萄糖标准溶液0.2,0.4,0.6,0.8和1.0mL,分别置于试管中,以1.0mL蒸馏水作为空白,再加入1mL5%的苯酚溶液和5mL浓硫酸,摇匀,静置15min,于490nm下测吸光度,以葡萄糖质量为横坐标,吸光度为纵坐标的作标准曲线。配制0.05mg/mL的多糖样品溶液按标准曲线方法操作,测定吸光度。

以上内容仅供大家参考,欢迎大家咨询购买上海亚荣生化仪器厂生产的旋转蒸发器等仪器。多糖经分子修饰尤其是硫酸化修饰后,构象发生变化,而构象变化往往是生物活性变化的决定因素,研究表明硫酸化多糖的生物活性与取代度关系密切,一般情况下取代度越大生物活性越强。目前对鱼腥草多糖的硫酸化分子修饰研究鲜见报道。试验采用浓硫酸法对鱼腥草多糖进行硫酸化分子修饰,考察不同时间对鱼腥草多糖的修饰效果及体外清除自由基活性,为鱼腥草多糖抗氧化活性的构效关系研究和资源开发利用提供参考。